7500定量PCR儀是特異性靶基因檢測與定量的一體化平臺。7500將PCR熱循環(huán),熒光檢測和各種應(yīng)用分析軟件結(jié)合在一起,可以動態(tài)觀察PCR每一循環(huán)各反應(yīng)管中PCR擴增產(chǎn)物逐漸增加的情況。PCR實驗結(jié)束后可以馬上得到定量結(jié)果,無需凝膠電泳分析,無需純化PCR產(chǎn)物,無需進行任何實驗操作。7500型實時熒光定量PCR儀采用96孔反應(yīng)板或單個及8聯(lián)管,反應(yīng)體積25-100微升,實驗可以在不到2小時內(nèi)結(jié)束。與其他人工基因定量分析方法如Northern blotting or RNase-protection assays相比,7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)具有時間省,靈敏度高,準確性好和線性范圍寬等優(yōu)點。
是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在7500定量PCR儀技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:
在90年代早期,TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。
第二此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應(yīng)管中能實時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導致7500定量PCR儀方法在研究工作中的運用。
7500定量PCR儀
7500定量PCR儀系統(tǒng)的特色:
1、擴增反應(yīng)曲線的實時監(jiān)測。
2、采用標準曲線進行靶基因的定量。
3、光源使用時間監(jiān)測及儀器系統(tǒng)自我診斷程序。
4、反應(yīng)板設(shè)置指南,使實驗設(shè)計非常簡單,即使是復雜的多重定量實驗也是如此。
5、自動設(shè)定熒光基線,自動計算熒光閾值使實驗結(jié)果分析大大簡化。
6、自動SNP分型軟件以直觀的圖表輸出分型結(jié)果并自動進行分型質(zhì)量評分。
7、解離曲線數(shù)據(jù)采集操作簡單觀察方便,可以在儀器運行時觀察解離曲線數(shù)據(jù)。
8、觀察實時擴增曲線時可以非常方便的標定所對應(yīng)的樣品孔位置。
9、基因表達相對定量軟件提供強大的結(jié)果分析顯示,可以自動將多達10塊96孔板基因表達實驗的數(shù)據(jù)同時分析,并自動去除無關(guān)項數(shù)據(jù),該軟件為選購件。